Выявление гельминтов, их фрагментов (члеников, головок, небольших паразитов), личинок и яиц основано на исследовании кала, мочи, мокроты, ректальной слизи, дуоденального содержимого, крови.
Большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или связанных с ним органах, поэтому исследование испражнений (копрологическое исследование) является наиболее распространенным методом лабораторной диагностики гельминтозов.
Осмотр испражнений.
При осмотре испражнений (макроскопический метод) в них можно обнаружить гельминты, их головки, обрывки стробилы, членики, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекомендуется для выявления остриц и члеников свиного цепня.
Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и, просматривая при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой, пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.
При методе отстаивания всю исследуемую порцию испражнений нужно размешать с водой в стеклянном цилиндре или горшке, затем осторожно слить верхний слой отстоявшейся жидкости. Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.
Микроскопия испражнений.
Микроскопия – основной метод исследования испражнений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз в связи с разрушением яиц или личинок поставить затруднительно или невозможно. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня.
Нативный мазок. Небольшое количество испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка. При небольшом количестве яиц в испражнениях этим методом выявить их удается не всегда. Поэтому исследование испражнений на яйца гельминтов только этим методом не является полноценным и достоверным.
Толстый мазок с целлофаном (метод Като).
Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью. Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мкм, нарезают пластинками с размером сторон 20х40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола. В 3-5 мл указанной смеси можно обработать 100 пластинок, которые в этом же растворе можно и хранить в хорошо закрытом сосуде.
Ход исследования. 100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана. Исследование при малом или большом увеличении микроскопа необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду – через 30-40 минут. Чрезмерное высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование. Метод Като позволяет исследовать большой объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскарид, власоглавов, лентецов, трематод, тениид. Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като мало эффективен.
Методы обогащения.
В основу методов обогащения положены разность удельного веса яиц и применяемого солевого раствора. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который и исследуют под микроскопом. Это метод осаждения (седиментации). При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. На этом принципе основаны методы всплывания (флотации). Лучшими являются методы флотации, особенно для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня. Для выявления яиц трематод применяют методы осаждения.
Метод Фюллеборна.
Основан на всплывании яиц гельминтов в растворе с высокой относительной плотностью и дает возможность выявлять яйца даже при небольшом их количестве.
Предварительно готовят насыщенный раствор хлорида натрия, растворяя 400 г его в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18-1,22. Раствор хранят в закрытой бутыли.
Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенным раствором хлорида натрия. Полоской бумаги тут же снимают всплывшие крупные частицы. Через 45-60 мин проволочной петлей снимают поверхностную пленку и стряхивают ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина, готовя таким образом 4 препарата на 2-х стеклах. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла. Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и остаются в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентецов.
При другом варианте этого метода вместо петли для снятия пленки применяют предметное стекло. Раствор хлорида натрия после размешивания с пробой испражнений доливают пипеткой доверху, до образования выпуклого мениска, и осторожно сверху на банку помещают предметное стекло так, чтобы оно своей нижней поверхностью соприкасалось с жидкостью. Всплывающие яйца гельминтов прилипают к поверхности стекла, которое после 45-60-ти минут отстаивания быстро снимают, переворачивают, помещают на столик микроскопа и исследуют.
К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность, к недостаткам – необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а так же длительность отстаивания.
Метод Калантарян.
Испражнения суспендируют во флотационном растворе высокой относительной плотности, при этом яйца гельминтов всплывают и могут быть обнаружены в поверхностной пленке раствора.
Предварительно готовят насыщенный раствор нитрата натрия, 1 кг которого заливают 1 л воды, кипятят до образования на поверхности кристаллической пленки и полного растворения, а затем переливают в сухую бутыль. Относительная плотность раствора 1,38.
В банку помещают 5-10 г испражнений и заливают при помешивании 100-200 мл концентрированного раствора нитрата натрия. При наличии банок меньшего размера соответственно уменьшают количество испражнений и раствора. Полоской бумаги сразу же снимают всплывшие крупные частицы. Затем пипеткой доливают раствор доверху до образования выпуклого мениска и накрывают предметным стеклом так, чтобы его поверхность соприкасалась с поверхностью раствора. Время отстаивания 25-35 мин. Чем выше температура в помещении, тем быстрее всплывают яйца гельминтов. После отстаивания стекло быстро снимают, переворачивают влажной поверхностью кверху, наносят 2-3 капли водного раствора глицерина и микроскопируют.
Достоинства метода: быстро и хорошо всплывают яйца большинства гельминтов, это исключает необходимость исследования осадка. Однако не всплыают онкосферы тениид, яйца описторхиса, фасциол и дикроцелия, что следует учитывать при исследованиях с целью диагностики указанных гельминтозов. Дороговизна нитрата натрия ограничивает применение метода. Можно использовать натриевую или аммиачную селитру из расчета 1,5 кг/л горячей воды. Относительная плотность раствора 1,3, т.е. ниже раствора нитрата натрия, и, следовательно, эффективность исследований снижается.
Метод Красильникова.
Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражнений и концентрируются в осадке.
Предварительно готовят 1% раствор стирального порошка «Лотос». Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100 С в течение 1-2 часов, затем 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии «Лотоса» можно использовать и другие стиральные порошки, но для каждого из них нужно брать столько порошка, сколько растворится без образования осадка в 1 л водопроводной воды.
В склянку, емкостью 30-50 мл наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений. Соотношение испражнений и раствора примерно 1:20. Испражнения должны находиться в растворе не менее суток. За это время на дне образуется осадок из 2-3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато-серые хлопья.
Пастеровскую пипетку с отбитым концом или глазную пипетку вводят в средний слой осадка и, не касаясь дна склянки, набирают 2-3 капли жидкости и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. При отстутствии склянок можно использовать пенициллиновые флаконы.
Методом Красильникова можно обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемых с испражнениями. При этом желательно испражнения помещать в раствор детергента не более чем через 1 час после выделения.